一、实验准备——尊龙凯时人生就博赖氨酰肽链内切酶125-05061

二、单位定义

尊龙凯时人生就博赖氨酰肽链内切酶125-05061的酰胺酶单位定义为在30℃、pH 9.5条件下，每分钟产生1μmol对硝基苯胺所需的酶量。单位计算公式为：
AU/vial = [(a - b) / 25] × (1 / 962) × (40 / 0.1)
a = 检测样品中的吸光度，b = 空白对照中的吸光度

三、实验操作流程

尊龙凯时人生就博建议使用聚硅酮处理的微量离心管和吸管，以防止任何蛋白的捕获。可使用质谱分析用的凝胶染色试剂盒，例如银染剂MS试剂盒（产品编号：299-58901）和负凝胶染色MS试剂盒（产品编号：293-57701），具体操作流程如下：

1. 电泳分离蛋白质样品。
2. 从凝胶中切下蛋白质片段，放入微量离心管中。
3. 使用脱色溶液对凝胶进行脱色。
4. 向试管中加入300μL乙醇，并轻轻振荡30分钟。
5. 去除乙醇，用Parafilm膜覆盖微量离心管。
6. 在Parafilm膜上打孔，进行真空干燥15分钟。
7. 将100μL 10mmol/L DTT溶解于100mmol/L碳酸氢铵中，56℃恒温1小时。
8. 室温冷却后，加入等量50mM碘乙酰胺溶液，暗处恒温45分钟并进行涡旋。
9. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵洗涤凝胶片段10分钟。
10. 用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
11. 用100μL 100mmol/L碳酸氢铵浸泡凝胶片段15分钟。
12. 再次用300μL乙醇干燥凝胶片段15分钟。
13. 去除液相，进行真空干燥15分钟。
14. 用100μL赖氨酸内切酶溶液在冰水浴中浸泡凝胶片段45分钟（赖氨酸内切酶稀释于50mmol/L Tris-HCl pH 8.5）。
15. 去除100μL赖氨酸内切酶溶液，将凝胶片段置于37℃、10μL 50mmol/L Tris-HCl pH 8.5中过夜。
16. 加入50μL 20mmol/L碳酸氢铵，20分钟内振荡凝胶片段进行3次多肽抽提。
17. 在20分钟内加入5%甲酸/50%乙醇进行3次多肽抽提。
18. 如有必要，用SpeedVac浓缩多肽。
19. 使用ZipTip进行多肽的脱盐和纯化。
20. 如有必要，将多肽用弱真空浓缩至2μL。
21. 加入基质以进行质谱分析。

四、购买渠道

通过尊龙凯时人生就博的代理——北京百奥创新科技有限公司，您可以获取尊龙凯时人生就博赖氨酰肽链内切酶125-05061及其他相关产品，欢迎随时咨询！