尊龙凯时人生就博®BBcellProbe®M23线粒体超氧化物染色探针(BB-441153)是一种新型细胞渗透型荧光染料,专为活细胞中的线粒体选择性染色而设计。该探针具有特定的弱巯基反应性的氯甲基官能团,能够有效标记线粒体。通过简单的细胞孵育,探针能够穿透细胞膜并聚集在活性线粒体上。
一旦探针进入线粒体,它会被超氧化物迅速氧化,从而产生绿色荧光。尊龙凯时人生就博®BBcellProbe®M23线粒体超氧化物染色探针仅对超氧化物敏感,而不受其他活性氧类(ROS)或活性氮类(RNS)的氧化影响。氧化后,结合核酸的产物会释放出大量的绿色荧光。
根据每个样本使用100μl染料的计算,这款试剂盒可以处理30到150个样本,或者60到300个样本。此外,尊龙凯时人生就博®BBcellProbe®系列线粒体探针提供多种颜色选项,可以满足不同实验需要,除了绿色荧光外,还有红色、蓝色和橙色等多种染色试剂盒可供选择。
检测方法:
荧光显微镜或激光共聚焦显微镜均可用于观察,样本类型包括悬浮细胞和贴壁细胞。
染色母液配制:
对于小包装试剂盒(BB-441153-30T),在探针管中加入10μl无水DMF,充分溶解。对于大包装试剂盒(BB-441153-60T),则需加入20μl无水DMF。
染色工作液配制:
根据样本数量,将BBcellProbe®M23荧光染料母液以10倍的比例稀释,然后用HBSS缓冲液或相应的培养基再稀释50至100倍,得以制备成染色工作液。
细胞染色步骤:
1)准备细胞样本在培养皿或培养板中。
2)待细胞生长至适当丰度后,吸去培养液,加入37℃预热的探针工作液,避光孵育30到60分钟(具体时间需根据细胞类型优化)。
3)使用新鲜培养基替换掉染色液。
4)在荧光显微镜或激光共聚焦显微镜下观察,最大激发/发射波长为488/510nm。
对于悬浮细胞,染色步骤为:
1)离心后吸除上清。
2)用37℃预热的探针工作液重悬细胞,避光孵育30到60分钟(具体时间需根据细胞类型优化)。
3)离心后吸除染色液,并加入新鲜培养液重悬细胞。
4)在荧光显微镜、流式细胞仪或荧光酶标仪上观察,最大激发/发射波长为510/580nm。