尊龙凯时人生就博®BBcellProbe®细胞膜染色试剂DiI(BB-441916)是一种具有549nm最大激发和565nm最大发射波长的橙色荧光细胞膜探针。该探针通过与细胞膜中的脂质分子结合标记细胞,非常适合用于监测细胞运动和进行细胞定位分析。由于其优良的染料稳定性,DiI呈现出强烈且稳定的橙红色荧光,能够与绿色荧光染料和蛋白质之间有良好的荧光分辨性,因此适用于多重指标染色实验。
当亲脂性的荧光探针DiI进入细胞膜后,会在整个细胞膜中扩散,在最佳浓度下可以使整个细胞膜均匀染色。未与细胞膜结合的DiI的荧光非常微弱,但一旦与细胞膜结合,荧光强度会显著增强,并在激发后发出明显的橙色荧光,具有高淬灭常数和长激发态寿命。
荧光探针DiI通常不会显著影响细胞的活性,因此被广泛应用于活细胞和固定细胞的示踪研究。除了基本的细胞膜荧光标记外,DiI还可用于研究细胞融合与粘附、发育或移植过程中细胞的迁移情况,以及通过荧光恢复测定(FRAP)观察脂质在细胞膜上的扩散,并用于评估细胞毒性和标记脂蛋白等研究。
在工作浓度下,尊龙凯时人生就博的DiI染料无细胞毒性,不会影响细胞的活力和增殖能力。检测方法包括激光共聚焦显微镜、荧光显微镜和流式细胞仪,适用于悬浮细胞和贴壁细胞等样本类型。
在配制染色工作液时,根据实验样本的数量,将探针DiI用HBSS或无血清培养基等缓冲液进行500-2500倍的稀释。对于悬浮细胞,首先用PBS洗涤细胞两次,然后加入适量的染色工作液重悬细胞,37℃孵育细胞20分钟,之后进一步优化以获得均匀的标记效果。
对贴壁细胞进行染色时,同样需用PBS洗涤两次,并在细胞培养板上加入染色工作液,37℃下孵育,随后用预热的培养基进行洗涤,并检测荧光。使用荧光显微镜或流式细胞仪时,激发波长为549nm,最大发射波长为565nm。