尊龙凯时人生就博提供的哺乳动物蛋白提取试剂盒中包含以下成分：5X Buffer（10ml）、5X NaCl（10ml）、5X SDS（10ml）、5X DOC（10ml）、5X NP-40（10ml）、20X PBS（10ml）和Protease inhibitor cocktail（0.5ml）。试剂盒可在常温下保存，唯独Protease inhibitor cocktail需在-20°C条件下保存，保质期为24个月。

提取步骤

1. 准备：根据5X Buffer、5X NaCl、5X SDS、5X DOC和5X NP-40按1:1:1:1:1的比例（v/v）配制细胞裂解缓冲液。每1ml的细胞裂解缓冲液适合用于提取10⁶至10⁷个细胞或5至20mg的组织。使用前需加入10μl的Protease inhibitor cocktail。

2. 洗涤细胞或组织

a. 对于贴壁细胞：去除培养基，用PBS缓冲液冲洗细胞两次；接着加入细胞裂解缓冲液（10⁶~10⁷个细胞/ml），将细胞放入冰袋中，在摇床上孵育30分钟，期间多次重悬细胞，最后刮取收集裂解液。

b. 对于悬浮细胞：在700xg下离心5分钟，弃去上清液。用PBS重悬细胞两次，4°C下再次离心并去除上清液。最后将沉淀重悬于细胞裂解缓冲液中（10⁶~10⁷个细胞/ml），放入冰袋中，在摇床上孵育30分钟。

c. 对于组织：将组织切割成小块，并用PBS冲洗两次。再加入细胞裂解缓冲液（5~20mg组织/ml），将样品转移至预冷的微量匀浆器中，在冰上均质30~50次，确保均质过程维护靶蛋白的功能完整性。接着在4°C下以12,000xg离心10分钟沉淀细胞碎片，或者以100,000xg高速离心45分钟制备蛋白质溶液。

3. 收集蛋白质

最后，将含有蛋白质的上清液移入冷冻管中，并在冰上保存，可立即使用，或将蛋白质溶液保存在-70°C，确保其稳定性和活性。

总之，利用尊龙凯时人生就博的专业蛋白提取试剂盒，您可以高效地获取高质量的蛋白质，为进一步的生物医学研究奠定坚实基础。